抗体药物-医药质量评估

分子量是有机化合物最基本的理化性质参数,正确与否往往代表着所测定的生物大分子的结构是否正确。MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱, 英文名Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱。该方法不产生或产生较少的碎片离子。它可直接应用于混合物的分析,也可用来检测样品中是否含有杂质及杂质的分子量。



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2016年10月18日

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多肽药物质量评估

分子量是有机化合物最基本的理化性质参数,正确与否往往代表着所测定的生物大分子的结构是否正确。MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱, 英文名Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱。该方法不产生或产生较少的碎片离子。它可直接应用于混合物的分析,也可用来检测样品中是否含有杂质及杂质的分子量。


分子量也是生物大分子如多肽、蛋白质等鉴定中首要的参数,也是基因工程产品报批的重要数据之一。MALDI-TOF的准确度达0.1%~0.01%(经验值),高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术,是目前表征分析中不可或缺的一门技术。



一、 N端/C端


蛋白大分子的N末端,C末端对于蛋白的结构稳定,功能,修饰都起着重大的作用。在药物结构确证分析中是必不可少的部分。


N端测序常见的方法为Edman降解法,但Edman降解法不能测出N端封闭,修饰等情况下的N端序列。质谱法N端可以克服这些不足,而且可以检测出对应的修饰,基本没有限制。


C末端没有类似Edman降解法类似的方式测序,国内外都基本认可和采用质谱法测试C末端,以及C末端修饰,如K丢失。



二、蛋白质纯度/纯度


  1. HPLC蛋白质纯度检测分析


生物制品对产品纯度业内都有一个规定要求,对此纯度检测是一项基础和必要的检测项目。


HPLC(高效液相色谱)利用样品不同成分间的特殊理化性质在经过分离柱是产出不同的保留时间从而达到分离效果,同时通过不同的物质的出峰峰面积计算成分的所占百分比。一般常用的分离柱为反相柱,分子筛等等。


2.HPLC肽段纯度检测分析


生物制品研发阶段与原研药或对照品同一性分析以及产品多批次之间稳定性分析是制药必不可少的一部分。HPLC肽段检测分析的原理是讲待检测样品通过特异性酶切之后检测酶解肽段特异性出峰图谱从而鉴定样品间的同一性,该检测项也是目前QC检验常用的方法。



三、糖分析


  1. N糖含量占比(N-糖基化修饰、糖谱)


含有不同结构糖基的蛋白其生理活性是不同的,对生物制品,如单抗,唾液酸成分对其功能有着重要的影响。比如末端结构为唾液酸的静脉注射免疫球蛋白所占比例低于4%。而恰恰是含有唾液酸的静脉注射免疫球蛋白是治疗抗炎症的有效成分。对糖的占比,结构等研究越来越成为业内人士的关注点。


技术策略:通过MALDI-TOF/TOF质谱对用PNGase-F酶处理前后的样品进行分子量检测,计算切掉N-糖前后的分子量差在整个蛋白分子量中的占比,从而客观评价N-糖含量。再通过C18石墨柱对PNGase-F酶处理后的样品进行N-糖糖链的富集,并用MALDI-TOF/TOF质谱检测和GlycoWorkBench软件分析,得到N-糖糖谱结果。


2.N-糖基化位点分析


技术策略:先用PNGase-F酶切除蛋白中的N-连接糖,再选用2种及以上的不同酶对蛋白进行酶切,质谱检测。在高覆盖率并覆盖到理论N-糖基化修饰位点的前提下,数据检索发现N-糖基化修饰位点的0.984Da质量漂移。从而确定N-糖基化修饰位点的存在。



四、抗体测序分析


本服务可满足获取单克隆抗体未知序列信息的需求。

氨基酸序列的准确性,是进一步生产研发的基础。因此,我们的服务在抗体测序的各环节都按照最严格的标准进行。

1、多酶酶解:使用更多的蛋白酶联合酶解,只为更深度序列交叠,更多重的测序信息。

2、高精数据:我们使用Orbitrap Fusion质谱进行分析。三倍于其它服务商的质谱使用成本,只为更丰富的碎片、更灵敏的信号,更坚实的数据基础。

3、正交算法:不同于其它服务商仅使用单一维度算法,我们使用“Dynamic Programming”、“Kinetic Fragmentation”、“Knuth-Morris-Pratt”等多种算法完成数据解析与检验。更多精力,更多算法,只为正确的测序结果。

(注意:对于非抗体类蛋白,同样提供测序服务。)


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