SNP检测-TaqMan探针法

SNP检测-TaqMan探针法,针对染色体上的不同的SNP位点别设计1对PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增,该探针的5’端和3’端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中有PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。

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2016年10月08日

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SNP检测法-SNaPshot法(小测序法)

TaqMan实验原理:

    针对染色体上的不同的SNP位点别设计1对PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增,该探针的5’端和3’端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中有PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。


TaqMan实验流程:

   DNA提取和质检,探针设计与合成,荧光定量PCR仪检测,数据分析


              


优点:

    1、特异性好、准确性高,操作简单;

    2、适合位点少样本多的情况。

 

缺点:

    1、两个SNP位点之间太近或者SNP序列附近有特殊结构,设计不出来探针。


牛启生物服务说明:

    1、需要客户提供的材料包括:组织 或 细胞 或 血液等样品材料 或 纯化好的DNA。

    2、需要客户提供目的SNP位点的rs号或该位点上下游各200bp的序列以及突变的类型。

    3、某些SNP由于上下游序列中含有其他SNP位点或特殊结构,无法采用TaqMan探针方法检测,遇到这种情况我们会在初期进行分析后通知客户选择其他方式。


实验结果:

    1、提供实验条件,包括引物和探针序列、试剂名称、仪器型号和操作步骤等。

    2、提供各样本、各SNP位点聚类图和分型表。

    3、可以提供部分原始数据图谱。


送样要求:

    1、组织样本:-20℃或-80℃低温冰箱中保存,液氮或者干冰运输;市内或短途运输可冰袋运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料,请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。

    2、DNA样本:体积≥50ul,浓度≥50ng/ul,DNA总量≥2ug,纯度 OD260/280 在1.7~1.9之间,不含PCR抑制剂,须注明准确浓度。样品须低温冰袋运输。

    3、血液样本:要求保存于抗凝管中或冻存管中,体积大于2ml,请用干冰运送,保证DNA不降解。

    4、样品为石蜡包埋组织切片的,要求提供10张组织切片光片(面积>10mm×10mm,厚度约5-10um)。



    科研创新服务-牛启生物专注为客户提供整体的科研项目、生物医学实验至科研成果的一体化解决方案;

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