实时荧光定量检测-绝对定量Q-PCR

实时荧光定量检测-绝对定量适用于病毒载量和病原菌精确分析、导入基因拷贝数解析、GMO精确解析、mRNA表达量精确分析等。绝对定量需要构建标准品和标准曲线,一般而言,有荧光染料SYBR Green或TaqMan探针法两种技术手段去实现。

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2016年08月08日

实时荧光定量检测-相对定量Q-PCR

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质谱鉴定和分析技术服务-MS技术服务

实时荧光定量检测-绝对定量适用于病毒载量和病原菌精确分析、导入基因拷贝数解析、GMO精确解析、mRNA表达量精确分析等。绝对定量需要构建标准品和标准曲线,一般而言,有荧光染料SYBR GreenTaqMan探针法两种技术手段去实现。


牛启生物服务内容:含标准品、标曲等


SYBR Green 染料法:

    SYBR Green I 是一种与双链DNA小沟结合的荧光染料,SYBR Green I只与双链DNA结合才能发出荧光,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,荧光信号与双链DNA分子数成正比,随着扩增产物增加而增加,荧光信号的强度代表了反应体系中双链DNA分子的数量。

 

TaqMan探针法:

    PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,随着扩增循环数的增加,释放出来的荧光基团不断积累,因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

 

牛启生物小提示:一般情况下进行研究采用SYBR Green 方法,成本低,而进行长期研究或检测的时候通常用TaqMan探针方法,这种方法准确性和特异性更好。


 

 

送样要求:

    基因信息,细胞107、组织≥300mg、血液≥1ml、基因组DNA或总RNA(体积≥20μl, 浓度≥500ng/μl)。

 

实验结果:

    引物和探针及序列,胶图,原始数据,数据分析结果及实验报告。



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