甲基化检测-甲基化特异性PCR法(Methylation-specific PCR,MSP检测)

甲基化检测-甲基化特异性PCR法(Methylation-specific PCR,MSP检测)。牛启生物MSP实验服务流程:基因组DNA制备,亚硫酸氢盐修饰,DNA纯化与回收,PCR, 电泳


添加时间:

2016年12月08日

细胞周期检测技术服务-细胞周期流式检测

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细胞迁移与细胞侵袭实验技术服务-transwell技术服务

 

 MSP实验原理:

MSP法的原理是基于DNA经亚硫酸氢钠处理后,所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。基于这种碱基的改变,然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增,最后通过琼脂糖凝胶电泳分析,确定与引物互补的DNA序列的甲基化状态。这种方法适于研究中大量样本的DNA片段,具有方便快捷,灵敏度高的优点,是目前牛启生物公司较为常用的甲基化检测方法。


 

牛启生物MSP实验服务流程:

基因组DNA制备,亚硫酸氢盐修饰,DNA纯化与回收,PCR, 电泳

 

优点:

    1、避免了使用限制性内切酶及其后续相关问题;

    2、敏感性高。

 

缺点:

    1、要预先知道待测片段DNA的序列;

    2、引物设计至关重要;

    3、若待测DNA5-甲基胞嘧啶分布极不均衡,则检测时较为复杂;

    4、这种方法只能作定性研究,即只能明确是否存在甲基化;若要求定量,则需用其他的方法进行进一步检测;

    5、存在重亚硫酸盐处理不完全导致的假阳性修饰过程中的pH值要绝对准确、所有试剂要求新鲜配置,并且需要反复摸索找出合适的反映时间。

 

送样要求:

   

     1、组织样本:-20℃或-80℃低温冰箱中保存,液氮或者干冰运输;市内或短途运输可冰袋运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料,请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。

    2DNA样本:体积≥20ul,浓度≥100ng/ulDNA总量≥2ug20℃保存,低温冰袋运输。

    3、血液样本:要求保存于抗凝管中或冻存管中,体积大于2ml,请用干冰运送,保证DNA不降解。

    4、样品为石蜡包埋组织切片的,要求提供10张组织切片光片(面积>10mm×10mm,厚度约5-10um)。





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