ELISA 检测技术服务-科研技术服务

ELISA 检测技术服务-科研技术服务,酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

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2016年11月11日

MicroRNA原位杂交技术服务-RNA原位核酸杂交服务

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蛋白质印迹法(免疫印迹试验, Western Blot, WB科研技术服务)

 

一、实验原理

酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

 

二、质量保证

牛启生物提供的检测用所有试剂,适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本,灵敏度极高,多年专业酶免服务,我们保证对所售任何产品一概负责到底,每一份实验结果都真实可靠。

 

三、注意事项

在收集标本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本,及时储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,请造模取材后,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向牛启生物上门经理索要取样资料,具体操作注意事项请与牛启生物公司人员沟通。


 

四、液体类标本

包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1、血清:

室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

2、血浆:

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

3、尿液:

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4、细胞培养上清:

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5、组织标本:

切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

 

五、ELISA方法简介

1、 包被抗原:稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液,多肽浓度2ug/ml0.1ml/孔,4oC过夜,洗净

21%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭,0.1ml/孔,37oC1h,洗净

3、 稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔,37oC 30分钟,洗净

4、 稀释辣根过氧化物每标记的二抗 0.1ml/孔,37oC 40分钟,洗净

5、 显色:TMB显色

A液:四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100

B液:5ul双氧水加蒸馏水12.5ml

终止液:2N硫酸

A液、B液各一滴,比光显色10分钟,终止液一滴

6450nm 波长 测OD



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